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標題動物組織樣本的前處理

   

提供者:上海恒遠生物科技有限公司    發布時間:2019/11/19   閱讀次數:31次 >>進入該公司展臺

    一、勻漿介質的制備:

    一般采用pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na, 0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質。

    二、組織勻漿的制備

    1.取組織塊(0.1g~0.2g)zui少可到2~5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準確稱重,放入5ml的勻漿管中。

    2.按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(pH7.4, 0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化鈉溶液)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

    3.勻漿的方式有多種:手工勻漿,機器勻漿,超聲粉碎。

    ① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8分鐘),充分研碎,制成10%的勻漿液。

    ② 機器勻漿:用組織搗碎機10000~15000 轉/分 上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續3~5次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。

    ③ 超聲粉碎:用超聲粉碎機進行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎,也可用國產超聲波發生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復3~5次。

    鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。

    4.將制備好的10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機2500轉/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進行測定.

    三、樣本保存:

    動物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如不反復凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。

    制備好的勻漿液建議不要凍存,zui好當天進行測定,如放置時間過長相關酶活會有所下降,部分指標4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測定可存5~7天等)

關鍵詞:ELISA試劑盒  

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