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雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒使用說明書

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資料簡介

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷。
 
雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒使用說明書
 
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒 試劑盒名稱】雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒 試劑盒用途】定量雞血清、血漿及相關液體樣本中微量轉鐵蛋白(MTF)的含量
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被微量轉鐵蛋白(MTF)透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中微量轉鐵蛋白(MTF)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中微量轉鐵蛋白(MTF)含量。
 
 
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
 
1、37℃恒溫箱
標準規格酶標儀
精密移液器及一次性吸頭
蒸餾水
一次性試管
吸水紙
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒操作步驟】
 
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
 
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
 
3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
 
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
 
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
 
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
 
7、溫育:重復4的操作。
 
8、洗板:重復5的操作。
 
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。
 
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
 
11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
 
12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒 樣本要求】
 
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
 
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
 
3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒注意事項】
 
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
 
2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
 
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
 
4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
 
5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.1-200ng/ml范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
 
6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
 
7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
 
8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
 
9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
 
 
【雞微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA檢測試劑盒操作程序總結】
 
1.準備試劑,樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
3.洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
4.洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內讀OD值
 
 
 
計算
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