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標題ELISA實驗血清樣本為什么都需要稀釋?

發布時間:2019/11/19  來源: 上海勁馬實驗設備有限公司   閱讀次數:33        

  每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對應的說明書,而每一份說明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋比例,為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中,小編將為您分析:為何ELISA實驗血清樣本都需要稀釋?

  在ELISA試劑盒實驗血清為什么要稀釋?有兩個原因:
    1.競爭抑制比較明顯,應稀釋競爭物
  2.以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來

  血清稀釋用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有效降低ELISA本底,當然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭,血清的稀釋倍數肯定要事先確定,但也不用一點點,你做一個預試驗即可,選擇OD在1.0左右的稀釋倍數,即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0,這樣作出來的曲線比較敏感。

  ELISA試劑盒實驗稀釋血清的步驟:
  先把蛋白稀釋一定的倍數,比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個參數),將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板,再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌,再加酶結合物進行反應,經孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應后分別測定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。

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